Relevamiento de Hongos y de vomitoxina en forrajes conservados

Relevamiento de Hongos y de vomitoxina en forrajes conservados

Mónica Gaggiotti; Silvia Corvoisier; María Basílico; Juan Basílico; Luis Romero y Eduardo Comerón

Resumen

Un intento hasta el presente para estudiar micotoxinas en forrajes conservados, en particular en silajes, ha sido la búsqueda de vomitoxina (DON) como marcador de la presencia de toxinas fúngicas. El objetivo de este estudio fue utilizar esta micotoxina como marcador en silajes y henos, como así también analizar la flora fúngica presente en los mismos y relacionar estos resultados con los obtenidos de los estudios químicos de los forrajes.

Se analizaron 30 muestras de forrajes conservados provenientes de productores de la zona de influencia de la EEA Rafaela INTA tomadas al azar. De las 30 muestras analizadas, 24 presentaron contaminación fúngica, de las cuales 8 contenían DON en un rango de 0,5 – 2ppm. Aún en ausencia del género Fusarium. como contaminante, se constató la presencia de DON. Por otra parte una muestra DON negativa presentó contaminación con Aspergillus flavus potencialmente productor de aflatoxinas. En las muestras de rollos de pastura base alfalfa contaminadas con DON, se observó que los mismos fueron confeccionados con alta humedad. Las características fermentativas de los silajes que presentaron contaminación fúngica indicaron que el proceso de conservación no fue el adecuado.

Introducción:

Los cultivos para granos y forrajes, durante su crecimiento, corren el riesgo de infectarse con diferentes hongos (Fusarium, Alternaria, Cladosporium, Claviceps y otros hongos endofíticos). Cuando se realiza la cosecha del grano o del forraje estos alimentos pueden estar contaminados con micotoxinas tales como tricotecenos, zearolenona, fumonisinas, moniliformina, ácido tenuazónico, alternariol, alcaloides del ergot, etc. (DiCostanzo et al., 1995).

Los problemas ocasionados por las micotoxinas en forrajes conservados han sido poco estudiados hasta el presente. Sin embargo, en todo el mundo, especialmente en regiones de clima cálido o templado, se han informado problemas de micotoxicosis en animales domésticos como consecuencia de su ingesta. Si bien no son considerados problemas mayores en la salud de los rumiantes, se sabe que son la causa de reducción en la productividad y en casos muy ocasionales, de muerte. El reconocimiento de micotoxicosis es extremadamente difícil de diagnosticar y el problema se agudiza por la falta de protocolos estructurados para el análisis de casos sospechosos .

Si en los ensilajes se logra una correcta eliminación del aire en un período corto de tiempo, esta condición de anaerobiosis evita el crecimiento de hongos y la posterior síntesis de micotoxinas. Cuando la confección del silaje no es correcta se dan condiciones de aerobiosis que permiten la contaminación del material, especialmente con hongos de los géneros Aspergillus y Penicillium que son potencialmente productores de toxinas tales como aflatoxinas, esterigmatocistina, ocratoxinas, citrimina y patulina entre otras (DiCostanzo et al., 1995).

Un intento para el estudio de micotoxinas en forrajes conservados, en particular ensilajes, es la búsqueda de vomitoxina (DON) como marcador de presencia de micotoxinas. La misma es producida por especies de Fusarium, siendo los cerdos y el ganado lechero las especies más susceptibles. Estudios realizados en Estados Unidos informaron niveles de DON (con variación entre zonas) que oscilaron, en la mayoría de los casos, entre 1 y 3 ppm (Gotlieb, 1997).

El objetivo de este estudio preliminar fue utilizar la vomitoxina (DON) como marcador de la presencia de micotoxinas en silajes y henos , como así también estudiar la microflora presente en los mismos y relacionar estos resultados con los obtenidos de los estudios químicos de los forrajes.

Materiales y métodos.

Se tomaron al azar 30 muestras de forrajes conservados pertenecientes a productores de la zona de influencia de la Estación Experimental Agropecuaria Rafaela del Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (área central de la provincia de Santa Fe, República Argentina).

Se estudiaron:

4 rollos de pastura base alfalfa
2 henolajes de pastura base alfalfa
3 silajes bolsa de pastura base alfalfa
1 silaje puente de pastura base alfalfa
4 silajes puente de sorgo planta entera
2 silajes bolsa de sorgo planta entera
5 silajes bolsa de grano húmedo de sorgo
5 silajes bolsa de maíz planta entera
4 silajes bolsa de grano húmedo de maíz

Aislamiento e identificación de géneros:

Se utilizaron las recomendaciones emanadas del segundo "Workshop" internacional para la estandarización de métodos para el estudio de hongos en alimentos (Pitt et al.,1992).

Identificación de especies (Aspergillus, Penicillum, Fusarium):

Aspergillus: Las especies fueron clasificadas según Gams et al. (1985) . Para la clasificación se utilizaron pautas de Klich y Pitt (1988).
Penicillium: Para su identificación se utilizó el software PENNAME.
Fusarium: Para su identificación se utilizaron las claves elaboradas por Booth (1977), Pitt and Hocking (1997).

Dosaje de DON:

Se procedió al dosaje de Vomitoxina (DON) en las muestras en las que se identificaron géneros de Aspergillus, Penicillium ó Fusarium por test ELISA.

Determinación de la capacidad toxicogénica de las cepas de interés:

Aspergillus flavus: realizada por simple observación de cultivos puros (Filtenborg y Frisvad, 1980).

Penicillium citrinum: realizada por simple observación de cultivos puros (Filtenborg y Frisvad, 1980).

Fusarium oxysporum y equiseti: se estudió la producción de zearalenona.

Fusarium solani: se estudió la producción de tricotecenos (Basílico et al., 1996).
Fusarium moniliforme: se estudia la capacidad de producción de fumonisinas, utilizando la técnica citada para F. solani modificando la temperatura.

Se evaluaron las características nutritivas (materia seca, proteína bruta, fibra detergente neutro y fibra detergente ácido ) de los forrajes y las fermentativas (pH y nitrógeno amoniacal) de los henolajes y ensilajes. Las mismas no se informan , detalladamente, en el presente trabajo.

Resultados y discusión.

Se encontraron hongos en 24 muestras de las 30 analizadas:

100% de los rollos de pastura base alfalfa (4)
0% de los henolajes pastura base alfalfa (0)
100% de los silajes bolsa de pastura base alfalfa (3)
100% de los silajes puente de pastura base alfalfa (1)
100 % de los silajes puente de sorgo planta entera (4)
100% de los silajes puente de sorgo planta entera (2)
80% de los silajes bolsa grano húmedo de sorgo (4)
80% de los silajes bolsa de maíz planta entera (4)
50% de los silajes bolsa de grano húmedo de maíz (2)

Se aislaron 52 hongos (22 con probable capacidad toxicogénica y 30 sin capacidad toxicogénica).

En la tabla 1 se presenta la distribución de los hongos aislados en función de su posible capacidad toxicogénica y en el gráfico 1 se muestra la distribución porcentual de los mismos.

Tabla 1: Distribución de los hongos aislados en función de su probable capacidad toxicogénica

En dos muestras se observó contaminación con Aspergillus fumigatus, que es un hongo reconocido por su capacidad patogénica (no toxicogénica) tanto para el hombre como para los animales que lo ingieren, por ocasionar micosis pulmonares.

Gráfico 1: Distribución de los hongos aislados en función de su probable capacidad toxicogénica

Se detectó vomitoxina (DON) en 8 de las muestras analizadas en niveles que variaron entre 0,5 y 2 ppm.

En la tabla 2 se presenta un análisis comparativo de los resultados obtenidos del dosaje de DON con los del estudio de capacidad toxicogénica de las cepas reconocidas potencialmente tóxicas.

Tabla 2: Análisis comparativo de los resultados obtenidos del dosaje de DON con los del estudio decapacidad toxicogénica de las cepas reconocidas potencialmente tóxicas

Las muestras de rollo de pastura base alfalfa en que se detectó la presencia de DON tenían valores de materia seca inferiores a los recomendados para la confección de heno (<80%). La presencia de mohos y de DON en silajes coincidió con muestras que poseían malas características fermentativas (pH superiores a los recomendados para las especies y valores de nitrógeno amoniacal que superaban el 15% del nitrógeno total).

Eliminar la presencia de oxígeno en los silajes constituye un factor determinante para evitar la producción de micotoxinas (Gotlieb, 1997).

Conclusiones:

La vomitoxina (DON) es un buen marcador de la presencia de micotoxinas.

La presencia de especies Aspergillus flavus productoras aflatoxina en algunas muestras DON negativo, indica que aflatoxina debería usarse también como marcadora en determinados casos.

Si la técnica de conservación se realiza en forma adecuada se puede evitar la presencia de hongos productores de micotoxinas y la producción de las mismas.

Bibliografía

Basílico, M.L.; Risca, A.P.; Pantanali, R.A. y Basílico, J.C. 1996. Optimización de las condiciones de fermentación para la producción de diacetoxiscirpenol. Rvta. Argentina de Microbiología 19: 4-8.
Booth, C. 1997. Fusarium. Laboratory Guide to the Identification of the Major Species; Commonwealth Mycological Institute, Ferry Lane, Kew, Surrey, England: 58 p.
DiCostanzo, A.; Johnston, L.; Felice, L.; Murphy M. 1995. Mycotoxins what do we know, what can we do? Tri- State Dairy Nutrition Conference, USA: 28 p.
Filtenborg, O. and Frisvad, J.C. (1980). A simple screening-method for toxigenic molds in pure cultures. Lebesm. -Wiss. U.- Technol.13: 128-130.
Gams, W.; Christensen, M.; Onions, A. H.; Pitt, J.I. and Samson, R. A.. 1985. Infrageneric taxa of Aspergillus. En "Advances in Penicillium and Aspergillus Systematics". De. Por Samson R.A., y Pitt, J. I.; New York: Plenum Press. : 55-62.
Gotlieb, A. 1997. "Causes of Mycotoxins in Silages"; Proceedings from the Silage: Field to Feedbunk; North American Conference Hershey, Pennsylvania February 11-13: 213-232.
Klich, M. A. y Pitt, J. I. 1988 "A laboratory guide to common Aspergillus species and their teleomorphs". De. por North Ryde, N.S.W.: CSIRO Divison of Food Research: 116 p.
Pitt, J.I.; Hocking, A.D.; Samson, R.A.; King, A.D. 1992. Recommended Methods for Mycological Examination of Food. En: Modern Methods in Food Mycology. 1ed., Elsevier Sc. Publishers B.V. Holanda: 365-368.
Pitt, J.I. and Hocking A.D. 1997. Fungi and Food Spoilage. Blackie Academic & Professional: 110-111